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微生物菌種凍干機(jī)操作流程
凍干機(jī)適用于大多數(shù)**、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏,但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲(chóng)等。其操作流程如下:
1、安瓿管準(zhǔn)備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí),先用2%鹽酸浸泡過(guò)夜,自來(lái)水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號(hào)及時(shí)間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓**15-20分鐘,備用。
2、保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備
保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度及pH值,以及**方法。如血清,可用過(guò)濾**;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3、凍干樣品的準(zhǔn)備
在zui適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后(參見(jiàn)科技部自然科技資源平臺(tái)聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測(cè)技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長(zhǎng)的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個(gè)球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)注意在無(wú)菌條件下操作。
4、預(yù)凍
一般預(yù)凍2小時(shí)以上,溫度達(dá)到-20℃到-35℃左右。
5、冷凍干燥
采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi),開(kāi)始冷凍干燥,時(shí)間一般為8-20小時(shí)。
終止干燥時(shí)間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷:
—— 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀
—— 真空度接近空載時(shí)的zui高值
—— 樣品溫度與管外溫度接近
—— 選用1-2支對(duì)照管,其水份與菌懸液同量,視為干燥完結(jié)
—— 選用一個(gè)安瓿管,裝1-2%氯化鈷,如變深蘭色,可視為干燥完結(jié)
冷凍干燥完畢后,取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi),備用。
6、真空封口及真空檢驗(yàn)
將安瓿管頸部用強(qiáng)火焰拉細(xì),然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測(cè)定儀測(cè)定真空度。
7、保藏
安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。
8、質(zhì)量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢查,如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。
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